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抗體和抗原間的結(jié)合率取決于親和常數(shù)。親和常數(shù)可受到溫度、pH和緩沖液成分的影響。改變?nèi)芤褐锌贵w和抗原的相對(duì)濃度也可控制抗體-抗原復(fù)合物形成的程度。由于通常無法改變抗原的濃度，因此必須針對(duì)每種應(yīng)用和每組實(shí)驗(yàn)條件確定各抗體的*佳工作濃度（稀釋度）。

許多Abcam抗體在數(shù)據(jù)表都有列出不同實(shí)驗(yàn)的推薦稀釋度。我們推薦嘗試用這些稀釋度開始實(shí)驗(yàn)。但是，這些稀釋度可能需要進(jìn)行某些優(yōu)化。

【優(yōu)化抗體稀釋度：滴定實(shí)驗(yàn)】

*佳滴度或稀釋度為在*少背景/非特異性結(jié)合的情況下得到*佳染色效果的濃度（稀釋度）。必須通過實(shí)驗(yàn)確定每次測(cè)定的*佳抗體濃度。通常通過在滴定實(shí)驗(yàn)中使用一系列稀釋度來確定。

當(dāng)實(shí)驗(yàn)室收到一種新抗體時(shí)，建議嘗試用滴定實(shí)驗(yàn)確定*佳抗體稀釋度以獲得*佳結(jié)果。

要進(jìn)行滴定實(shí)驗(yàn)，首先要選擇固定的孵育時(shí)間。然后制備一系列實(shí)驗(yàn)稀釋度的抗體以備測(cè)試。每種稀釋度應(yīng)針對(duì)相同類型的樣品進(jìn)行測(cè)試，以保持實(shí)驗(yàn)條件標(biāo)準(zhǔn)化。

許多抗體批間性能差別不大，因此您只需要進(jìn)行一次滴定實(shí)驗(yàn)。但是，多克隆抗血清抗體濃度在不同動(dòng)物間或不同血清采集時(shí)間可能顯著不同。在這些情況下，或者當(dāng)您注意到任何抗體的批次間染色結(jié)果有變化時(shí)，我們推薦再次對(duì)該瓶抗體進(jìn)行滴定實(shí)驗(yàn)以獲得*佳濃度。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司