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人葡萄球菌蛋白A(SPA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作步驟

點(diǎn)擊次數(shù):13077   發(fā)布時(shí)間:2015/3/31 10:38:33

很多研究生在訂購(gòu)elisa試劑盒的時(shí)候,會(huì)問(wèn)到有關(guān)試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟等問(wèn)題, 就在剛才,我司錢(qián)經(jīng)理接到鐘老師的來(lái)電,她說(shuō)想咨詢下人葡萄球菌蛋白A(SPA)ELISA試劑盒,不知道這試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟是怎樣操作的,能否發(fā)份說(shuō)明書(shū)給我看下嗎,我司錢(qián)經(jīng)理把說(shuō)明書(shū)發(fā)他看下。
 2015/03/31 09:38:55對(duì)方已成功接收了您發(fā)送的離線文件“人葡萄球菌蛋白A(SPA)說(shuō)明書(shū).pdf”(148.91KB)。
下面是我司錢(qián)經(jīng)理為客戶整理的一份人葡萄球菌蛋白A(SPA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作步驟:
人葡萄球菌蛋白A(SPA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制:
1.儀器與材料:酶標(biāo)儀(使用前預(yù)熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。
2. 洗液的配制:按1:30的比例配制洗液備用。
人葡萄球菌蛋白A(SPA)ELISA試劑盒操作步驟:
1)取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘。
2)分組:取出96孔板,根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組(6個(gè)濃度)、空白孔、待測(cè)樣品組。
3)標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)簻?zhǔn)備小試管6 只,依次編好號(hào)碼,先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul,然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第三只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第五只試管中,充分混勻;然后在該試管中取100ul,棄掉。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。
注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。
4)加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水;其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
5)溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
6)洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒棄去,如此重復(fù)5 次,拍干。
7)加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液(空白對(duì)照孔除外)。
8)溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。
9)洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標(biāo)板5次,用吸水紙徹底拍干。
10)顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul。
11)終止:25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,加入50ul終止液。
12)讀板:在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值。
注:讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi),以免影響準(zhǔn)確性。

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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