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ELISA研究視角來看實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)內(nèi)容

閱讀次數(shù)：1012 發(fā)布時(shí)間：2014/9/23 8:42:02

在操作實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，不少新手會忽略了實(shí)驗(yàn)的主要原理這一問題。ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點(diǎn)，今天上海恒遠(yuǎn)帶您從ELISA研究視角來看實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)內(nèi)容，ELISA實(shí)驗(yàn)新手可要注意嘍！

對于一些小分子的檢測，比如前列腺素、糖皮質(zhì)激素的檢測，可以選擇用競爭法ELISA去檢測，也要購買采用這個(gè)方法的盒子。一般細(xì)胞因子的檢測，都是采用常規(guī)的夾心法ELISA檢測，因?yàn)橐蜃臃肿恿勘容^大，一般10幾個(gè)KD左右，很容易找到兩個(gè)或者多個(gè)抗原表位。而小分子很難找到兩個(gè)不同的表位，也就決定了包被抗體和檢測抗體無法同時(shí)結(jié)合小分子并固相化。解決方案就是酶標(biāo)板上包被二抗，每個(gè)孔加入一定量的酶標(biāo)的小分子，然后加樣品，再加不帶標(biāo)記的檢測抗體，顯色底物。樣品的目的小分子的含量越高，吸光度越低。

·ELISA研究之浸泡式洗滌：

1. 吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液；

2. 用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去)；

3. 浸泡，即將洗滌液注滿板孔，放置1-2分鐘，間歇搖動，浸泡時(shí)間不可隨意縮短；

4. 吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)徹底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干；

5. 重復(fù)操作c和d，洗滌3-4次(或按說明規(guī)定)。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時(shí)間。

微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán)，也含親水基團(tuán)，其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合，并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫 20，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時(shí)，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。

ELISA研究也是要靠經(jīng)驗(yàn)總結(jié)的，做的多了自然就熟練了。了解更多的相關(guān)資料內(nèi)容您可以在本網(wǎng)站中留言，也可以給我司業(yè)務(wù)員來電。